注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

人腎透明細(xì)胞腺細(xì)胞英文名稱：786-0

金直絲鏈霉菌 Streptomyces aureorectus大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

HL-60, 人早幼粒白血病細(xì)胞人腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuǎn)肺成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白英文名稱：Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

Dami(人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系

GST標(biāo)簽蛋白裂解20 ug20μg、100μg

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae彎曲桿菌 Lactobacillus curvatus

緩沖蛋白胨水(緩沖胨水增菌) (BPW) 規(guī)格： 250g 用途： 用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng)。（美國FDA charpter 4）

河蟹顫抖病病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格桑白皮素  Mulberry root bark pigment  分子量：*：30-2006

4-溴-3-甲-5-(三氟甲)-1H-吡唑    4- -3- (three -5-) -1H-*：60061-68-9分子量： C5H4BrF3N2

間溴甲  171.04  Between toluene*：591-17-3分子量： C7H7Br

DBD-COCl  332.76  DBD-COCl*：156153-43-4分子量： C11H13ClN4O4S

2,6-二甲啉  115.17  2,6- two methyl morpholine*：141-91-3分子量： C6H13NO

4,5,6,7-四氫噻吩并[3.2-c]吡  139.22  4,5,6,7- four [3.2-c] pyridine*：54903-50-3分子量： C7H9NS

麗春紅S  Ponceau S  760.61分子量： C22H12N4Na4O13*：6226-79-5

N-乙酰  150.18  N- hydracetin*：114-83-0分子量： C8H10N2O

丙  72.11  Hydrazine hydrate*：7422-78-8分子量： C3H8N2

雙(三氟乙酰氧)  430.04  Double (three fluorine acetoxy) iodobenzene*：2712-78-9分子量： C10H5F6IO4

噁唑  69.06  Oxazole*：288-42-6分子量： C3H3NO

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。